Akademik Veri Yönetim Sistemi
Karakaya H. (Yürütücü), Şahin N., Çebi Kılıçoğlu M.
TÜBİTAK Projesi, 2001 - 2004
Bu proje siyanobakteriyel glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PDH) enziminin ışık/karanlık geçişlerinde düzenlenişinde disülfit bağlarının rol alıp almadığını göstermek üzere yürütülen çalışmaları içermektedir. Daha önce gerçekleştirilmiş biyokimyasal ve moleküler genetik araştırmalar bu düzenlenmede disülfit bağ oluşumu/yıkımı mekanizmasının rol alabileceğini desteklemektedir. Bu çalışmada siyanobakteriyel glukoz-6-fosfat dehidrogenaz geninin (zwf) sistein kodonlarının değiştirilmesi ve bu mutant genlerin Dzwf Synechococcus sp. PCC 7942 hücrelerine nakli denemeleri yürütülmüştür. Dzwf mutasyon eldesi çalışmaları için gerekli olan vektör tasarımı ve altklonlama çalışmaları tamamlanmasına rağmen genin sistein kodonlarını silerek yerine bir interpozon eklenmesi çalışmalarında başarılı olunamamıştır. Sistein kodonlarının değiştirilmesi çalışmaları da bir mutagenez kiti (Promega, Altered Site II in vitro Mutagenesis Kit) kullanılarak gerçekleştirilmeye çalışılmıştır, ancak bu çalışmada da sonuca ulaşılamamıştır. Altyapı yetersizliğinden kaynaklanmış olabilecek problemleri aşabilmek ümidiyle çalışmalar İngiltere Warwick Üniversitesinde üç ay süreyle sürdürülmüştür. Bu çalışmalara gen düzenlenmesi bakımından daha avantajlı olması nedeniyle Synechocystis sp. PCC 6803 zwf yürütülen çalışmalarda mutant segregasyonu tamamlanmıştır. Yapılan karakterizasyon çalışmalarında PCR amplifikasyonu ile mutasyon bölgesi gözlenmiştir. Enzim aktivitesi analizlerinde mutant geninin klonlanmasıyla başlanmıştır. Bu klon üzerinden bir Dzwf mutasyonu elde edilmiş ve bu mutasyon yabani tip Synechocystis sp. PCC 6803 hücrelerine transfer edilmiştir. Daha sonra hücrelerde enzim aktivitesinin sıfırlandığı belirlenmiştir. Halen mutant hücrelerin fizyolojik ve moleküler karakterizasyon çalışmaları devam etmektedir. Kısa bir süre içerisinde bu çalışmanın sonuçları uluslararası bir dergide yayınlanabilir hale gelecektir. Aynı süre içinde yürütülen sistein kodonlarının değiştirilmesi çalışmasından sonuç alınamamıştır. Bu çalışma için daha uzun optimizasyon çalışmalarına ihtiyaç vardır ve tamamlanabildiği taktirde önde gelen bir uluslararası dergide yayınlanabilir verilere ulaşılabilecektir.